凯氏定氮仪测定蛋白质有哪几个步骤呢

点击次数：1728 更新时间：2023-02-28

凯氏定氮仪是根据凯氏定氮法设计的用于测定化合物或混合物中总氮量的一种仪器。使用前需要校准的项目有空白试验、回收率的测定、仪器的测量重复性。

凯氏定氮仪样品消化

浓硫酸具有脱水性和氧化性，可使有机物中的碳、氢被氧化为二氧化碳和水，蛋白质会分化为氨，然后氨与硫酸结合生成硫酸铵。一般参加硫酸钾和硫酸铜作为催化剂来加速蛋白质分化。硫酸钾能够行进溶液的沸点，一般情况下，纯硫酸的沸点在340℃左右，可是在添加硫酸钾后，可行进至400℃以上。行进温度使有机物加速分化。可是不能参加过多的硫酸钾，不然会因为温度过高，使生成的硫酸铵发生热分化成氨而构成丢掉。硫酸铜除作为催化剂外，还能够指示消化完毕的抵达，有机物悉数消化后，溶液呈现清澈的蓝绿色，硫酸铜还能够做蒸馏时碱性反响的指示剂。

凯氏定氮仪蒸馏

消化液中的硫酸铵在碱性环境下会转化成氨。为避免水中微量的氨气受热逸出，影响测定效果，所以水蒸气发生器中的水要坚持酸性。硫酸铵是一种强酸弱碱盐，需求满足的碱液使结合态的氨反响并释放出来，这个进程中的氢氧化钠一定要过量，过量的氢氧化钠会与硫酸铜生成蓝色的氢氧化铜堆积，氢氧化铜受热分化成黑色的氧化铜堆积。查验蒸馏是否结束，可用奈氏试纸法，NH4+或NH3遇奈氏试剂会反响生成棕赤色的铵化合物。

凯氏定氮仪吸收

加热蒸馏放出的氨可用硼酸溶液吸收，硼酸有吸收氨的效果，又因其呈微小酸性，不影响下一步滴守时指示剂的变色反响。温度过高会使硼酸吸收液对氨的吸收效果削弱，然后构成丢掉，故一般不逾越40℃。

凯氏定氮仪滴定

待吸收完后，用硫酸或许盐酸规范溶液进行酸碱滴定，滴定液的浓度直接影响效果的准确性，有必要按照要求进行制作和标定。混合指示剂在中性溶液中呈灰色，滴定完毕时液体呈灰色。

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